【广东会GDH基因检测】让基因检测结果更加正确的窍门：MLPA的应用

MLPA代表Multiplex Ligation-dependent Probe Amplification，是一种分子生物学技术，结合了引物探针依赖的PCR（Polymerase Chain Reaction）和多重探针靶向的特点。

MLPA的原理基于以下几个步骤：

引物探针混合物的设计：MLPA使用两种类型的DNA引物：探针和引导片段。探针包含用于特定序列的识别和连接的序列。引导片段有着共同的序列，用于PCR扩增和检测。

样品处理：样品中的DNA首先被变性并且探针结合。如果样品中存在目标序列，探针就会与之结合。

连接反应：连接酶被加入样品中，它们识别并连接探针上的相邻序列。

PCR扩增：引导片段启动PCR扩增反应，放大连接的DNA序列。

分析：扩增产物经过分析，通常通过凝胶电泳或其他技术，以确定是否存在特定的DNA序列，并量化这些序列的数量。

MLPA的应用范围广泛，主要包括：

基因组结构变异的检测：MLPA可用于检测基因组中的拷贝数变异（CNV），这是一种导致遗传疾病和癌症等疾病的常见形式的基因变异。

遗传疾病的诊断：MLPA可用于检测单基因遗传疾病，如囊性纤维化、地中海贫血等。

肿瘤诊断：MLPA可以帮助诊断肿瘤，并确定肿瘤细胞中的基因组变异，以指导治疗方案。

遗传多态性的研究：MLPA可用于研究人群中的遗传多态性，例如检测SNP（单核苷酸多态性）和基因座的等位基因。

总的来说，MLPA是一种高效、正确且灵活的技术，可用于研究和诊断多种遗传性疾病和基因组变异。

MLPA探针

MLPA探针混合物中含有针对特定基因组序列的探针。一个MLPA探针由两部分组成:左探针oligonucleotide(LPO)和右探针oligonucleotide(RPO)。LPO和RPO包含PCR引物和DNA杂交序列。RPO中额外的"填充"序列使每个探针具有独特的长度。

样本变性和探针杂交

先进步是纯化样本DNA并将其变性。然后与MLPA探针oligo过夜孵育。每个探针的LPO和RPO部分会与邻接的目标DNA序列杂交。
 

探针连锁

第二步是将杂交至邻接目标序列的探针oligo进行连锁。在连锁位点附近不允许有任何不配对的情况,这使连锁反应高度特异。探针连锁产物的数量反映了样本中目标序列的数量。

探针扩增

第三步是使用单一通用引物对连锁的探针进行多重PCR扩增。只有连锁的探针才会指数级扩增,因此无需去除未结合和未连锁的探针。

片段分离

第四步是使用毛细管电泳对片段进行分离。PCR产物被加载到毛细管电泳仪上,按长度分离。每个片段对应一个特定的MLPA探针。

数据分析

贼后一步是使用基因解码软件进行数据分析。通过将测试样本中参考探针和目标探针的相对峰高与已知正常拷贝数的参考样本进行比较,来确定相对拷贝数。先进的质量检查有助于识别不高效的数据。